1908年2月5日，澳門發(fā)生了轟動一時的“二辰丸案”。日本商船二辰丸號偷運槍炮彈藥入境，被我海關(guān)水師在路環(huán)島附近的大沙瀝海面截獲。商船船主已承認違法，服從懲處。但是日本政府卻和葡萄牙殖民者串通一氣，先后向清政府發(fā)出抗議照會。日本聲稱二辰丸是在葡萄牙的領(lǐng)水上航行，抗議清政府越境截捕商船，要求“速放該船，交還國旗，嚴罰所有非法之官員，并陳謝此案辦理不善之意，以儆效尤。”①葡萄牙的照會亦聲稱“二辰丸是裝載槍枝運卸澳門，該船被拿，有違葡國所領(lǐng)沿海權(quán)，并有礙葡國主權(quán)，阻害澳門商務(wù)”，要求“即刻釋放”。②在帝國主義外交壓力下，清政府被迫屈服。消息傳到廣東，輿論嘩然。人民對日葡勾結(jié)，欺壓中國表示無比憤慨。廣東人民一貫反對葡人肆意擴占澳門以外領(lǐng)土，要求劃定澳門界址，杜絕逾越。早在1907年底，廣州、香山和香港等地的紳商士民就紛紛向政府請愿，要求“派員來澳劃分界限”。③二辰丸案更使要求劃界的運動迅速發(fā)展起來。1908年底，中國駐法公使劉式訓(xùn)前往里斯本，同葡萄牙政府商談澳門劃界問題。1909年2月，中葡雙方達成協(xié)議，決定派員查勘澳門界址，談判地點設(shè)在香港。葡萄牙派曾任葡屬東非殖民總督的馬沙鐸(Machado)將軍為談判代表，中國方面的談判代表則由曾任中法云南交涉使的福建籍官員高而謙出任。

7月1日，中葡談判在香港正式開始。馬沙鐸在第一次會議上提出了索地要求。他聲稱，澳門包括：一、澳門半島，由媽閣直至關(guān)閘；二、海島包括對面山（即灣仔、銀坑、南屏、北山等28鄉(xiāng)）、青洲、凼仔、路環(huán)、大小橫琴、馬騮洲等島嶼；三、領(lǐng)水則為以上陸地及海島附近之水路；四、關(guān)閘至北山嶺為“局外地”。①按照這個劃界方案，葡萄牙新擴占的領(lǐng)土將比原租居地面積大30倍之多。

清政府在這次交涉中軟弱無力，采取了以讓步求妥協(xié)的方針。外務(wù)部主張：先查明葡人的原租界作為澳門本土，原租界圍墻以外最先占領(lǐng)的地方劃為屬地。澳門附近島嶼，不論是否已被占領(lǐng)，一概極力拒駁。這些意見傳達至談判代表高而謙那里的時候，他又擅自作了修改，變?yōu)樵试S澳葡在凼仔和路環(huán)已占地居留。②清政府這種妥協(xié)方針違反民族利益，不符合人民反抗侵略和收復(fù)失地的強烈愿望?？墒瞧咸蜒乐趁裾邊s仍不滿足。馬沙鐸在談判會上態(tài)度十分蠻橫。在葡方代表的壓力下，高而謙又表示，中國愿意“割棄澳門半島（由媽閣至關(guān)閘），以及青洲、凼仔、路環(huán)等地，附近內(nèi)河和海面由中葡共管”。③但葡萄牙殖民者并不感到滿足。馬沙鐸堅持索取對面山和大小橫琴島，以及控制全部水界，使劃界交涉陷入僵局。