1966年夏，“文化大革命”開始了。8月5日，陳伯達(dá)在講話中宣稱劉少奇是“資產(chǎn)階級(jí)反動(dòng)路線”的總代表，陳少敏感到非常震驚，她公開說：“我不同意這種看法!”康生、江青一伙得知她公開維護(hù)劉少奇，便派人把陳少敏關(guān)進(jìn)“黑幫”樓，剝奪了她住院治病的權(quán)利。

1968年10月，黨的八屆十二中全會(huì)在北京召開。在31日的全體會(huì)議上，當(dāng)大會(huì)宣布就“永遠(yuǎn)開除劉少奇出黨”的決定進(jìn)行舉手表決時(shí)，陳少敏沒有舉手。散會(huì)時(shí)，康生找陳少敏質(zhì)問：“開除劉少奇的黨籍，你為什么不舉手?”陳少敏答：“這是我的權(quán)利！”

1969年10月，林彪借口“戰(zhàn)備疏散”，將陳少敏遣送到河南省羅山農(nóng)場(chǎng)勞動(dòng)改造。出發(fā)時(shí)，她已病得很重，由別人抬上火車。由于鄉(xiāng)村醫(yī)療和生活條件太差，她的心臟病、腎病先后復(fù)發(fā)，從此癱瘓了。直到1971年林彪垮臺(tái)后，她才回到北京治療。